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PCR
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)

服務(wù)編碼

項目名稱

項目報價

項目周期

BT5001

細(xì)胞培養(yǎng)

2000元

1-2周

BT5002

細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

3000元

1-2周

BT5003

穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建

咨詢

咨詢

一、服務(wù)內(nèi)容

1、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選

通過轉(zhuǎn)染試劑或電穿孔方式等方式,將目的基因?qū)胭N壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞24-48小時后,目的基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。此時為了建立穩(wěn)定細(xì)胞系,可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標(biāo)記,選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選,從而得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆。觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能(短時間即可進(jìn)行觀察,但效應(yīng)會很快丟失)。

2、針對不同種類細(xì)胞使用藥物,低氧,壓力等外源因素進(jìn)行刺激等處理,建立相關(guān)的細(xì)胞模型,從而進(jìn)行后續(xù)的研究工作。

二、樣品要求(樣品處理及保存見附件)

1干冰運輸:取對數(shù)生長期的細(xì)胞,消化后低速離心1000rpm5min收集細(xì)胞,加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細(xì)胞分裝入凍存管中,標(biāo)明細(xì)胞的名稱、細(xì)胞代次、凍存時間及操作者;放4℃冰箱30min,-2030min1h-80℃過液,然后放入液氮罐;細(xì)胞數(shù)目不少于5×106/ml;

2常溫運輸:細(xì)胞貼壁覆蓋瓶底面積達(dá)40%以上時,裝滿培養(yǎng)液,瓶口用封口膜封好,裝入盒子,盒子里用泡沫或棉花塞滿,讓瓶子固定在盒子中。

三、服務(wù)特點

1、針對不同細(xì)胞系篩選合適的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒濃度配比,提高轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)量

2、豐富的抗生素篩選經(jīng)驗和單細(xì)胞克隆鑒定方法提高實驗效率

3、構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株可穩(wěn)定傳代,極少發(fā)生性狀丟失

四、收費標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)項目

收費標(biāo)準(zhǔn)¥

實驗周期

蛋白瞬時表達(dá)或敲低

基因表達(dá)或敲低載體構(gòu)建

請參見載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

載體轉(zhuǎn)染

3000/樣品

1

Western Blot檢測蛋白表達(dá)或敲低

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建(混合克隆)

表達(dá)載體構(gòu)建

請參見載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

40000/細(xì)胞系

3-4

Western Blot檢測穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建(單克?。?/span>

表達(dá)載體構(gòu)建

請參見載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

50000/細(xì)胞系

6-8

Western Blot檢測穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白敲低細(xì)胞系構(gòu)建(單克?。?/span>

shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建

請參見載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

60000/細(xì)胞系

6-8

Western Blot檢測敲低細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白真核表達(dá)(分泌表達(dá))

分泌型表達(dá)載體的構(gòu)建

請參見載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

細(xì)胞轉(zhuǎn)染

3000/質(zhì)粒

2

蛋白表達(dá)檢測(Western Blot ELISA

2000/目的蛋白/膜;600/

2

蛋白表達(dá)和純化

20000/mg

2

五、客戶提供材料

1、待克隆基因和載體信息,待敲低基因信息和shRNA序列信息(如無相關(guān)shRNA序列信息,本公司可代為設(shè)計并收取相關(guān)費用);

2、待轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(如需使用常用腫瘤細(xì)胞株,如293/293T、HeLa等可由本公司提供);

3、陽性對照樣品(盡量提供)

4、相關(guān)文獻(xiàn)(可選)

六、提交給客戶結(jié)果

1、構(gòu)建完成的載體和甘油菌株;

2完整測序報告和序列堿基圖

3、載體真核表達(dá)鑒定結(jié)果

4、載體真核表達(dá)蛋白

5、穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株>1×107

6、穩(wěn)定敲低細(xì)胞株>1×107

7、完整實驗報告(包括基因擴(kuò)增圖,細(xì)胞株過表達(dá)和敲低檢測結(jié)果圖等)







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